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荧光定量PCR和数字PCR的区别

发布时间:2020-05-20      点击次数:2543

关键词:荧光定量PCR仪、数字PCR仪、微量分光光度计

定量PCR还是数字PCR

随着数字PCR技术应用的展开,越来越多实验室被其定量的方式、结果的高灵敏度、高重复性等特质所吸引。2012年年底,由Frost & Sullivan公司在北美市场进行的调研显示,约三分之一的被访者表示会考虑购买数字PCR设备。

那么,是否意味着目前在研究、临床和工业领域内,广泛采用的荧光定量PCR技术将被淘汰?数字PCR很快就要将其彻底取代?越来越多实验室对陈斯卡提出类似问题。结合多年推广定量PCR与近几年投身数字PCR领域的经验心得,陈斯卡谈谈自己的体会,供大家参考。

陈斯卡总体的观点是:虽然绝大多数定量PCR的应用都可以使用数字PCR完成,但在可预期的将来,两者将长期共存。到底使用定量PCR还是数字PCR,取决于具体应用和对数据的要求。两者不是either/or的关系,而是both/and的关系。两种技术平台各自的特点与现状大致可从下面8个方面说明。

1.   在20多年的使用和发展中,定量PCR作为一种技术平台,已经产出海量的数据,在工业界和分子检测的某些应用上,定量PCR已经成为“金标准”。基础研究方面,则形成了被称为MIQE的“定量PCR标准实验指南”。

2.   在定量PCR的各种应用中,基因表达分析(gene expression analysis)的应用比重约占七成,综合各种因素来看,眼下定量PCR还是进行基因表达研究的理想手段。

3.   上述的“各种因素”具体展开,主要包括:通量、自动化程度、各种检测探针与染料、检测通道、成本和可参考文献与protocol的数目等等。

4.   就目前市场上已有的数字PCR设备来看,定量PCR在检测的线性范围上具有优势,意味着同一个run内可对各种表达丰度的样品进行分析。

5.   目前定量PCR已经能实现高通量样品条件下的自动化操作。

6.   数字PCR在单分子层面上的定量,可以彻底摆脱对标准曲线的依赖而直接给出靶序列的拷贝数,提高了实验结果在批内和批间的稳定性,甚至能用来对标准品进行定标。

7.   基于定量的方式,数字PCR结果的高重复性和高精度可实现微小差异的基因表达分析,如等位基因的不平衡表达、单细胞基因表达分析、microRNA表达分析等等。所谓“微小差异”的标准一般而言是指表达水平的差异在2倍以内。

8.   同等条件下,数字PCR在灵敏度方面拥有优势,使得该技术已成为肿瘤的液态活检、病原微生物检测、转基因成分测定、宿主残留DNA分析等的热门技术。

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