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紫外分光光度法测定维生素A的含量

发布时间:2015-06-03      点击次数:697

紫外分光光度法测定维生素A的含量

1.原理

维生素A的异丙醇溶液在325 nm波长下有zui大吸收峰,其吸光度与维生素A的含量成正比。

本法的灵敏度较比色法高,可测定维生素A含量低于5μg/g的样品。主要缺点是在维生素Azui大吸收波长325 nm附近许多其他化合物也有吸收,干扰测定,故本法适用于透明鱼油,维生素A的浓缩物等纯度较高的样品。对于一般样品,测定前必须先将脂肪抽提出来进行皂化,萃取其不皂化部分,再经柱层析除去干扰物。

2.仪器

3.试剂

①异丙醇。

②维生素A标准溶液:称取1 g相当于50 000单位维生素A的浓鱼肝油0.1000 g,加异丙醇溶解,定容至125 mL。此溶液1 mL相当于40单位(即40 IU.mL-1)。

4.测定步骤

①标准曲线绘制:分别取维生素A标准溶液(40 IU·mL-1)O.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4·0 mL,于10 mL棕色容量瓶中,用异丙醇定容。以空白液调仪器零点,于紫外分光光度计上在325 nm波长下分别测定吸光度,绘制标准曲线。

②样品测定:称取适量样品,按照三氯化锑比色法进行皂化、提取、洗涤、浓缩、蒸发醚层后,迅速用异丙醇溶解并移人50 mL容量瓶中,用异丙醇定容,于紫外分光光度计325nm处测定其吸光度,从标准曲线上查出相当的维生素A含量。

5.计算

X=[(c*V)/m]*100

 

式中:X——样品维生素A的含量,IU·(100 g) -1;

   c——由标准曲线查得的维生素A含量,IU·mL-1;    .

   V——样品的异丙醇溶液体积,mL;

   m——样品质量,g。

 

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