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分光光度法测试微量元素

发布时间:2015-06-03      点击次数:1038

分光光度法测试微量元素

一、锡----苯芴酮比色法

试样经消化后,在弱酸性溶液中四价锡离子与苯芴酮形成微溶性橙红色络合物,在保护性胶体存在下与标准系列比较定量。

1、酒石酸溶液(100 g/L)

2、抗坏血酸溶液(10 g/L):临用时配制。

3、动物胶溶液(5 g/L):临用时配制。

4、酚酞指示液(10 g/L):用乙醇溶解。

5、氨水(1+1)

6、硫酸(1+9)    

7、苯芴酮溶液(0.1g/L):称取0.020 g苯芴酮(1,3,7一三羟基一9一苯基蒽醌),加少量甲醇及硫酸(1+9)数滴溶解,以甲醇稀释至200 mL。

8、锡标准使用液(10.0ppm):

吸取 1.00mL-5.00mL试样消化液和同量的试剂空白溶液,分别置于25mL比色管中。

吸取 0, 0.20,0.40,0.60,0.80,1.00 mL锡标准使用液(相当0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0ug锡),分别置于25mL比色管中。

于试样、消化液、试剂空白液及锡标准液中各加0.5 mL酒石酸溶液(100g/L)及1滴酚酞指示液,混匀,各加氨水(1+1)中和至淡红色,加3 mL硫酸(1+9),1mL动物胶溶液及2.5 mL抗坏血酸溶液,再加水至25mL_,混匀,再各加2 mL苯芴酮溶液,混匀,1小时后测量,用2 cm比色杯以水调节零点,用可见分光光度计于波长490 nm处测吸光度,标准各点减去零管吸光值后,绘制标准曲线或计算直线回归方程,试样吸光值与曲线比较或代人方程求出含量。

二、磷

食物中的有机物经酸氧化,使磷在酸性条件下与钼酸铵结合生成磷钼酸铵。此化合物被对苯二酚、亚硫酸钠还原成蓝色化合物——钥蓝。用可见分光光度计在波长660 nm处测定钥蓝的吸收光值。

1、15%硫酸溶液:  

2、钥酸铵溶液:1g/200ml,用15%硫酸溶液稀释。

3、亚硫酸钠溶液:20g/100ml,临时配制,否则可使钥蓝溶液发生混浊.

4、磷标准使用液(10.0ppm):

吸取0.625,1.25,2.5,3.75,5,6.25 ml磷标准使用液(相当于含磷量0,5,10,20,30,40,50ug)分别置于25mL具塞试管中。

准确吸取试样测定液2.5mL及同量的空白溶液,分别置于25ml具塞试管中。

依次加人2.5mL钼酸溶液摇匀,静置几秒钟。加人1.25 ml亚硫酸钠溶液,1.25 mL对苯二酚溶液,摇匀。加水至刻度,混匀。静置30分钟以后,在分光光度计660 nm波长处测定吸光度。以测出的吸光度对磷含量绘制标准曲线。

三、镍

试样中的镍用稀酸提取后,在强碱性溶液中以过硫酸铵为氧化剂,镍与丁二酮杇形成红褐色络合物,与标准系列比较定量。

国标是非消化处理的,是不是称多点就可以了,但又考虑消化时间可能太长。

1、丁二酮圬(C4H3N202,)一乙醇溶液(10g/L):    

2、酒石酸钾钠溶液(500 g/L):

3、氢氧化钠溶液(100g/L):              

4、过硫酸铵溶液(60g/L):临用现配,

5、镍标准使用液(1.0ug):

吸取 0,1,2,4,6,8,10,12,14,16ml镍标准使用液,分别置于25mL具塞比色管中。

吸试样多少?

于试样及标准管中分别依次加人1.25mL酒石酸钾钠溶液,3.75mL氢氧化钠溶液,1.25mL过硫酸铵溶液,混匀,放置3 min。再各加人0.5 mL丁二酮圬一乙醇溶液,加水至25mL,混匀。放置15 min后,用3cm比色杯,以水调节零点,于可见分光光度计波长470 nm处测吸光度,绘制标准曲线比较。

四、微波消解——分光光度法测定大豆中的硼量

分别吸取0、0.5、1.5、2.5、3.5、5 、6 、7.5mL 硼标准使用液, 于25mL 比色管中;

加5mL 乙酸铵缓冲溶液, 加2.5 mL 甲亚胺溶液, 混匀, 加水至刻度, 摇匀。放置1 h , 于可见分光光度计420 nm 处,测量吸光度。

试样用(1+1)HN3·H2O 溶液调节pH 至6.5 左右。

1、硼标准使用液(5.0ppm):               

2、氨水1+1:

3、乙酸铵缓冲溶液(pH 6.7): 取115 g 乙酸铵, 稀释到500mL , 再加入33.5g EDTA , 混匀.

4、甲亚胺溶液(9.0 g/L): 现配.称取1.8g 甲亚胺和4 g抗坏血酸, 于200mL 水中, 微热溶解。

五、水质硼的测定——甲亚胺-H 酸光度法

本方法的检出浓度为 0.03ppm, 测定上限为5.0ppm(相当于10.0ppm的 HBO2) 可用于饮用水,地面水中硼的测定。锡、碲、汞与显色试剂生成白色沉淀,铝铍钛锆钒镓钼(VI)生成黄色,铜、铬生成棕黄色,铁(III) 铁(II)均对测定有干扰,可用EDTA加以掩蔽,钾钠的存在会减缓反应的速度但可延长反应时间,在6h 后再进行测定而消除干扰。

原理

在pH5.2 的盐酸和乙酸铵缓冲溶液中,硼与甲亚胺-H 酸生成可溶于水的甲亚胺H-硼酸棕黄色化合物,其zui大吸收波长在410~420nm 处,由于显色速度慢,6h后发色完全,该化合物在30h内稳定。

试剂:

1、乙酸铵水溶液500g/L : 

2、1+4 盐酸溶液:40ml稀释至200ml  

3、EDTA 饱和溶液: 常温下溶解度是0.2g/L, EDTA二钠盐的溶解度较大,在22℃时,每100毫升水中可镕解11.1克,此溶液的浓度约为0.3moL/L-1。由于EDTA二钠盐水溶液中主要是H2Y2-,所以溶液的pH值接近于4.42。其溶解度比较小受温度影响比较大长时间存放可认为其溶解度不变, 一般来说是用其钠盐酸化后制得饱和溶液。

4、硼标准使用液(10ppm):

5、甲亚胺-H 酸显色剂:准确称取0.50g 甲亚胺-H 酸和2g 抗坏血酸溶于100mL 去离子水中,现用现配。

测定:

准确移取HBO2标准使用液0 、0.1、0.3、0.625、1.25、2.5、7.5、15ml分别移入25ml比色管;

分别加入0.50mL EDTA 饱和溶液,2.5mL盐酸溶液(1+4) ,5.0mL 乙酸铵溶液,摇匀后准确加入6.00mL 甲亚胺-H 酸显色剂,摇匀并用去离水稀释至标线,摇匀。

测量静置暗处6h后,用10mm 比色皿于可见分光光度计于420mm 波长处以空白试验溶液作参比测定吸光度

注意事项

(1) pH 对显色反应有影响适宜的pH 范围在5.2~5.8

(2) 显色剂甲亚胺-H 酸易氧化故应保存在有塑料压盖的棕色瓶中试剂现用现配同时加入抗坏血酸防止氧化

(3) 当HB02 浓度在6.0mg/L 时,在50mL试液中加入6.0mL 的显色剂是*的络合比。

(4) 硬质玻璃中常含有硼 试样的预处理和显色操作不能用玻璃器皿所使用的玻璃器皿不应与试样溶液作长时间接触,用其他玻璃器皿时应先进行全程序空白试验用扣除空白的方法以消除玻璃器皿的影响

(5) 配制试剂用的水均需用石英蒸馏器重蒸馏过的水或用去离子水。

六、分光光度法测定白花蛇舌草中的钛含量

准确移取10ppm 的钛标准使用液0, 1, 2,3, 4, 5 mL 分别置于25 mL 容量瓶中,

各加1∶1 盐酸10mL、10% 抗坏血酸0.5 mL , 摇匀, 各加2% 二安替比林甲烷5mL , 用水稀释至刻度, 摇匀静置30 min 。波长为383 nm.

样品加10% 抗坏血酸至完全褪色。加2% 二安替比林甲烷5mL , 用水稀至刻度, 摇匀。

1、钛标准使用液(10ppm);      

2、盐酸溶液1 mol/L:

3、二安替比林甲烷溶液2%: 准确称取10.0g 二安替比林甲烷粉末, 用1 mol/L 的盐酸溶液溶解并定容至500 mL。

七、水中微量硅的硅钼蓝光度法测定

硅钼蓝光度法测定硅, 一般在较高酸度下正硅酸与钼酸铵形成β型黄色硅钼杂多酸, 用还原剂还原成蓝色硅钼蓝, 在可见分光光度计于波长810~820nm 进行光度法测定。

目前, 已知的还原剂种类很多, 且各有优缺点, 如氯化亚锡、硫酸亚铁铵, 还原速度快、灵敏度高, 而稳定性差; 抗坏血酸, 硅钼蓝很稳定, 而还原速度太慢;硫酸亚铁和草酸混合作还原剂, 混合液稳定时间短; 胺基萘酚磺酸, 硅钼蓝稳定时间虽长, 但易产生沉淀而还原能力降低; 米吐尔-Na 2SO3 作还原剂易产生沉淀, 还原速度较慢且不稳定。本文研究和配制了甲醛合次硫酸氢钠和亚硫酸钠混合液, 作为水中微量硅的(硅钼蓝) 光度法测定的还原剂, 实验证明其稳定性、还原能力、灵敏度、准确度均较好, 还原剂可保存时间较长。

标准硅使用液(20ppm):

钼酸铵溶液: 称取7.2 g 钼酸铵于50mL 烧杯中, 加10mL 蒸馏水加热溶解, 趁热慢慢把它加入5mL浓硫酸和11mL 浓硝酸中, 搅拌均匀, 稍冷后用水稀释至30mL, 如有浑浊, 放置后过滤.

酒石酸溶液:21g/30ml

甲醛合次硫酸氢钠(还原剂) 溶液: 称取1.50 g 甲醛合次硫酸氢钠和4.0 g 亚硫酸钠于烧杯中, 加蒸馏水溶解至30mL, 贮于棕色带滴管小瓶中。

测定:

准确吸取硅标准使用液0,0.2,0.5,0.7,0.9,1.2,1.5 mL 于25mL 比色管中,加入0.2ml钼酸铵, 摇匀, 放置4~5min,然后加入0.15ml酒石酸, 摇匀, 放置2min, 再加入0.4ml还原剂, 用蒸馏水稀至刻度, 摇匀, 置于沸水浴中加热3~5min, 取出流水冷却至室温, 在可见分光光度计于波长810~820nm 和1mL 比色皿中, 用试剂(或蒸馏水) 作参比,测其吸光度A值。

八、光度法同时侧定磷和硅的研究

磷和硅与钼酸铵都能生成黄色配合物, 此配合物与还原剂如能同时被还原为钼蓝, 但草酸能迅速破坏磷钼黄, 且实验表明, 在0~2ppm范围内, 磷钼蓝和硅钼蓝的吸光度加合性良好。故在一定条件下, 先测出磷、硅都存在时的吸光度, 再在相同条件下, 加入草酸,测出硅钼蓝的吸光度, 二者之差即为磷钼蓝的吸光度, 然后分别在其相应的工作曲线上查出对应的磷和硅的含量。

钼酸铵溶液(2.5﹪):

NaF(0.24﹪)-SnCL2(0.2﹪):2.4g NaF/100ml水,再加0.2g SnCL2,当天使用。

草酸溶液(1﹪):

硫酸(1mol/L):

磷标准使用液(10ppm)

硅标准使用液(10ppm)

吸0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml的标准使用液于25ml比色管中,加入1.2ml硫酸(1mol/L),2.5ml的钼酸铵溶液, 沸水浴加热30秒, 10ml NaF(0.24﹪)-SnCL2(0.2﹪),冷却后稀释至刻度,摇匀。用1cm比色皿,可见分光光度计于690nm处, 以试剂空白为参比测量吸光度.

九、铝

试样经处理后,三价铝离子在乙酸一乙酸钠缓冲介质中,与铬天青S及溴化十六烷基*胺反应形成蓝色三元络合物,于640nm波长处测定吸光度并与标准比较定量。

1、1%(体积分数)硫酸:0.1ml稀释至10ml.

2、乙酸一乙酸钠溶液:称40.8g乙酸钠溶于540mL水中,加3.12ml冰乙酸,调pH至5.5,用水稀释至600mL,

3、铬天青S溶液(0.5 g/L):

4、溴化十六烷基*胺溶液(0.2 g/L):0.04g/200ml ,必要时加热助溶。

5、抗坏血酸溶液(10g/L):临用时配。

6、铝标准使用液(1.0ppm):

应保证试样溶液中含1﹪硫酸.

吸取 0,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,6.0m L铝标准使用液(相当于含0, 0.5, 1.0,2.0,4.0,6.0ug)分别置于25mL比色管中,依次向各管中加人1mL 1%硫酸溶液。

吸取1.0 mL消化好的试样液,置于25mL比色管中。

向标准管、试样管、试剂空白管中依次加人8.0 ml乙酸一乙酸钠缓冲液,1.0 ml抗坏血酸溶液,混匀,加2.0 mL溴化十六烷基*胺溶液,混匀,再加2.0mL铬天青S溶液,摇匀后,用水稀释至刻度。室温放置20min后,用1cm比色杯,于分光光度计上,以零管调零点,紫外可见分光光度计于640 nm波长处测其吸光度,绘制标准曲线比较定量。

十、锌 ----双硫腙比色法(一次提取)

样品经消化后,在pH4.0~5.5时,锌离子与双硫腙形成紫红色络合物,溶于,加入硫代硫酸钠,防止铜、汞、铅、铋、银和镉等离子干扰,与标准系列比较定量。

试剂:

1.乙酸钠溶液(2 mol/I):称取68 g乙酸钠(CH,COONa·3H,O),加水溶解后稀释至250 mL,

2.乙酸(2mol/L):量取10.0 mL冰乙酸,加水稀释至85mL,

3.乙酸一乙酸盐缓冲液:乙酸钠溶液(2 mol/L)与乙酸(2 mol/L)等量混合,此溶液pH为4. 7左右。用二硫腺一溶液(0. 1 g/L)提取数次,每次10 mL,除去其中的锌,至层绿色不变为止,弃层,再用提取乙酸一乙酸盐缓冲液中过剩的二硫踪,至无色,弃去。

4.硫代硫酸钠溶液(250 g/L):乙酸钠溶液(2 mol/L)与乙酸(2 mol/L)等量混合,此溶液pH为4. 7左右。用二硫腺一溶液(0. 1 g/L)提取数次,每次10 mL,除去其中的锌,至层绿色不变为止,弃去层,再用提取乙酸一乙酸盐缓冲液中过剩的二硫踪,至无色,弃去。

5. 1:1氨水

6.甲基橙指示液(2 g/L):称取0.2 g甲基橙,用乙醇(20%)溶解并稀释至100 Ml

7.盐酸(2 mol/L):量取10 mL盐酸,加水稀释至60 mL,

8.锌标准使用液(1.0ug):

10. 二硫踪一溶液(0.01g/L)。

吸取5.0~10.0mL定容的消化液和相同量的试剂空白液, 分别置于25mL比色管中;

吸取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL锌标准使用液(相当0、1、2、3、4、5μg锌),分别置于25mL比色管中。

于样品消化液、试剂空白液及锌标准液中各加1滴甲基橙指示液,用氨水调至由红变蓝,再各加5mL乙酸-乙酸盐缓冲液及1mL硫代硫酸钠溶液混匀后, 各加10.0mL0双硫腙-溶液,定容至25ml.剧烈振摇4min,静置分层,经脱脂棉将层滤入1cm比色杯中,以调节零点,于可见分光光度计波长530nm处测吸光度,绘制标准曲线比较。

十一、锌试剂- 环己酮分光光度法测定乳制品奶粉中的锌

吸取0、0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、10.0、15.0ml锌标准液;

各加入2滴酚红指示剂用氢氧化钠(40 g/L)溶液调至红色,再用盐酸( 1+50)调至黄色,加入0.5克抗坏血酸, 5.0ml缓冲液, 2.0 ml溶液(10 g/L)和3.0 ml锌试剂溶液再加入1.5 ml环己酮。混匀,放置15min用1 cm 比色皿,以试剂空白为参比于可见分光光度计620 nm波长测定吸光度。

1、酚红的乙醇溶液(1 g/L):

2、氢氧化钠(40 g/L):      

3、盐酸(1+50):         

4、抗坏血酸

5、缓冲液:称取42 g粒状氢氧化钠,溶于水, 加入155 g 硼酸, 溶解后再加纯水至500 ml;所用试剂均为分析纯,实验用水为纯水。

6、溶液(10 g/L):          

7、锌标准使用液(10.0ppm):

8、锌试剂溶液:紫棕色结晶性粉末。溶于乙醇和碱,溶于氢氧化钠呈红色,不溶于水。遇锌生成蓝色化合物,稀时为溶液,浓时为深蓝色沉淀。

十二、微波消解- 紫外分光光度法测定水中总氮

取一定量水样于聚四氟乙烯密封消解罐中, 加水至25 mL, 摇匀。

分别取0.、0.1、0.3、0.5、0.7、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0、12.0、13.0、15.0 mL氮标准使用液于聚四氟乙烯密封消解罐中, 加水至25 mL, 摇匀。

依次加入0.50 mL H2O2 , 0.50mL 9 mol/L硫酸溶液, 加盖密封后于微波消解炉中10档加热8 min, 冷却至室温。注入10 mm石英比色皿中, 分别在紫外可见分光光度计的220和275 nm处测定其吸光度, 用双波长紫外分光光度法进行总氮测定。氮含量在0.024 2~9.60ppm之间时与吸光度成线性关系,以去离子水代替试样做空白试验。

过氧化氢是用于消解水中的有机物质包括含氮有机物的, 因此其用量是一个重要的控制因素。实验发现, 在过氧化氢用量为0.40~0.80 mL之间吸光度基本保持不变,

酸性条件下, 过氧化氢具有较强的氧化性; 但酸性过强, 又不利于NH4+ 转化为NO3- 。

1、氮标准使用液: 20 mg/L硝酸钾标样;

2、硫酸溶液(9 mol/L;)

3、过氧化氢溶液(0.3 g/mL);         

4、本实验用水均为无氨水

十三、氟——灰化蒸馏— 氟试剂比色法

试样经硝酸镁固定氟,经高温灰化后,在酸性条件下,蒸馏分离氟,蒸出的氟被氢氧化钠溶液吸收,氟与氟试剂、硝酸镧作用,生成蓝色三元络合物,与标准比较定量。

本方法所用水均为不含氟的去离子水,试剂为分析纯,全部试剂贮于聚乙烯塑料瓶中。

1 丙酮:需500ml.

2 盐酸(1+11):取10mL盐酸,加水稀释至120mL.

3 乙酸钠溶液(250g/L):       

4 乙酸溶液(1mol/L):取3ml,稀释至50mL.

5.氢氧化钠溶液(40g/L):

6 茜素氨羧合剂溶液: 现配。称取0.19 g茜素氨羧络合剂,加少量水及氢氧化钠溶液(40 g/L)使其溶解,加0.125g 乙酸钠,用乙酸溶液调节pH为5.0(红色),加水稀释至500ml。

7 硝酸镁溶液(100 g/L):

8 硝酸镧溶液: 现配。称取0.11 g硝酸斓,用少量乙酸溶液溶解,加水至约225 ml,用乙酸钠溶液(250 g/L)调节pH为5.0,再加水稀释至250mL。

9 缓冲液(pH4. 7):称取30 g无水乙酸钠,溶于400 mL水中,加22 mL冰乙酸,再缓缓加冰乙酸调节pH为4. 7,然后加水稀释至500mL.

10 氢氧化钠溶液(100 g/L):

11 酚酞一乙醇指示液(10 g/L):

12 硫酸(2+1):

13、氟标准使用液(5.0ppm):

称取混匀试样5.00g (以鲜重计),于30m1坩埚内,加5.0 m L硝酸镁溶液和0.5m L氢氧化钠溶液(100 g/L)、使呈碱性,混匀后浸泡0.5 h,置水浴上蒸干,再低温炭化,至完全不冒烟为止,移人马弗炉中,600度灰化6h,取出,放冷。

于坩埚中加10m L水,将数滴硫酸(2十1)慢慢加人坩埚中,防止溶液飞溅,中和至不产生气泡为止。将此液移人500mL蒸馏瓶中,用20mL水分数次洗涤坩埚,并入蒸馏瓶中。

于蒸馏瓶中加60mL硫酸(2+1),数粒无氟小玻珠,连接蒸馏装置,加热蒸馏。馏出液用事先盛有5 mL水、7滴~20滴氢氧化钠溶液(100 g/L)和1滴酚酞指示液的50mL烧杯吸收,当蒸馏瓶内溶液温度上升至190℃时停止蒸馏(整个蒸馏时间约15 min-20 min),

取下冷凝管,用滴管加水洗涤冷凝管3次~4次,洗液合并于烧杯中。再将烧杯中的吸收液移人50 mL容量瓶中,并用少量水洗涤烧杯2次~3次,合并于容量瓶中。用盐酸(1+11)中和至红色刚好消失。用水稀释至刻度,混匀。

吸取0,1.0,3.0,5.0,7.0,9.0 mL氟标准使用液(相当0,1,3,5,7,9ug氟) 于25 mL带塞比色管中。

分别吸取试样蒸馏液各10.0 mL于25 mL带塞比色管中。

各加2.OmL茜素氨羧络合剂溶液、3.0 mL缓冲液、6.0 mL丙酮、2.0 m L硝酸镧溶液,再加水至刻度,混匀,放置20m in,以3cm比色杯(参考波长580nm)用零管调节零点,测各管吸光度,绘制标准曲线比较。

 

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