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紫外分光光度法测定过氧化氢含量

发布时间:2015-07-01      点击次数:5902

紫外分光光度法测定过氧化氢含量

 

紫外分光光度法测定过氧化氢含量

美析仪器

 

关键词:分光光度法;过氧化氢;美析仪器; UV-1500

 

【原理】

H2O2与硫酸钛(或氯化钛)生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀,可被HSO4溶解后,在415nm波长下比色测定。在一定范围内,其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。

【仪器和用具】

研钵;移液枪0.2ml和枪头,5ml×1支;容量瓶10ml×7个,离心管5ml×8支;离心机;UV-1500型紫外可见分光光度计。

【试剂】

100μmol/L H2O2试剂;2mol/L硫酸;5%(W/V)硫酸钛;丙酮;浓氨水。

30% H2O2指的是过氧化氢溶液的质量比,其密度为1.1g/cm3,而过氧化氢的分子量是34.02,通过这些参数,我们可以推算出30%的过氧化氢的摩尔浓度为9.7mol/L.

    【方法】

1.制作标准曲线:取10ml离心管7支,顺序编号,并按表40-1加入试剂。

表40-1  测定H2O2浓度标准曲线配置表

试剂(ml)

离  心  管  号

1

2

3

4

5

6

7

100μmol/L H2O2

0

0.1

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

4℃下预冷丙酮

1.0

0.9

0.8

0.6

0.4

0.2

0

5%硫酸钛

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

浓氨水

0.2

0.2

0.2

0.2

0.2

0.2

0.2

 

3000r/min 离心10min,弃去上清夜,留沉淀

2mol 硫酸

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

    待沉淀完全溶解后,将其小心转入10ml容量瓶中,并用蒸馏水少量多次冲洗离心管,将洗涤液合并后定容至10ml刻度,415nm波长下比色。

2.样品提取和测定:(1)称取新鲜植物组织2~5g(视H2O2含量多少而定),按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后,转入离心管3000 r/min下离心10min,弃去残渣,上清液即为样品提取液。(2)用移液管吸取样品提取液1ml,按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水,待沉淀形成后3000rpm/min离心10min,弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤3~5次,直到去除植物色素。(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml,待完全溶解后,与标准曲线同样的方法定容并比色。

3.结果计算:

     植物组织中H2O2含量(μmol/g Fw)=

式中  C—标准曲线上查得样品中H2O2浓度(μmol);

          Vt—样品提取液总体积(ml);

          V1—测定时用样品提取液体积(ml);

          FW—植物组织鲜重(g)。

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